Skillnad mellan nitrocellulosa och PVDF
Share
Huvudskillnad - Nitrocellulosa vs PVDF
Western blotting är en metod som medger detektering och kvantifiering av specifika proteiner från ett proteinprov. Teknikens tillförlitlighet beror på valet av ett korrekt membran för absorption av proteiner från gelén. Det finns olika typer av mikroporösa membran. Nitrocellulosa och PVDF-membran är två sådana membraner som föredrages av forskarna på grund av deras speciella egenskaper över de andra typerna av membran. Urvalet mellan nitrocellulosa eller PVDF är också en annan utmaning vid western blotting. Både nitrocellulosa och PVDF har en hög proteinabsorptionskapacitet. Den viktigaste skillnaden mellan nitrocellulosa och PVDF-membran är det nitrocellulosemembran har inte förmåga att avlägsna antikroppar och återanvända membranet för antikroppsreprovering, medan PVDF-membran har strippnings- och återanvändningsförmåga.
INNEHÅLL
1. Översikt och nyckelskillnad
2. Vad är Nitrocellulosa
3. Vad är PVDF
4. Jämförelse vid sida vid sida - Nitrocellulosa vs PVDF
5. Sammanfattning
Vad är Nitrocellulosa?
Nitrocellulosa är en polymer som tillverkas genom att behandla cellulosa med salpetersyra och används för att framställa mikroporösa membran i molekylärbiologi, speciellt för blottingstekniker såsom södra, nordliga och västra blotting. Porstorlekarna av nitrocellulosemembran sträcker sig från 3 till 20 pm. Nitrocellulosa mikroporösa membran underlättar detektering av immunokemisk reaktion som sker på membranets yta. Därför används nitrocellulosamembran ofta för immobilisering av proteiner och detektion av specifika proteiner i western blotting. Nitrocellulosa membran kan också immobilisera glykoproteiner och nukleinsyror.
Nitrocellulosemembran är föredragna vid sidoflödesanalyser på grund av flera särdrag. Nitrocellulosa membraner absorberar proteiner vid hög koncentration. Lösningsmedlet som användes för att blöta membranet minskar inte nitrocellulosemembranproteinabsorptionen. Nitrocellulosa membraner kan lätt skäras till önskad gelstorlek och överföra proteiner från gelén till membranet genom elektrisk eller kapillär överföring. Nitrocellulosa möjliggör snabbare flöde av proteiner genom membranet med hög bindningspotential. Nitrocellulosa visar en förbättrad styrhantering. Ett annat speciellt attribut av nitrocellulosamembran är att det lätt kan limmas med vattenlösliga klister som inte är lösningsmedel på olika plastunderlag.
Figur 01: Nitrocellulosa membran för western blotting
Vad är PVDF?
Polyvinyliden-difluorid (PVDF) är fluorpolymer framställd genom polymerisation av vinyliden-difluorid och har en hög immobiliseringsförmåga hos proteiner. Därför används mikroporösa membran framställda av PVDF i western blottingstekniker för att analysera specifika proteiner från blandningarna av proteiner. PVDF-membran kan också användas för aminosyraanalys och proteinsekvensering. Den viktigaste egenskapen hos PVDF-membran över nitrocellulosamembran är att det lätt kan avlägsnas från antikropparna och återanvändas för efterföljande antikroppssonder.
PVDF-membran är tjockare än nitrocellulosamembran; därmed mer resistenta mot skador vid återanvändning. PVDF-membran är mycket hydrofoba. Därför måste de blötläggas i metanol eller isopropanol före användning.
Vad är skillnaden mellan nitrocellulosa och PVDF?
Nitrocellulosa vs PVDF | |
| Nitrocellulosa är en polymer bestående av cellulosa. | PVDF är en fluorpolymer framställd genom polymerisation av vinyliden-difluorid. |
| Membranporstorlek | |
| Typiska porstorlekar är 0,1, 0,2 eller 0,45 ^ | Typiska porstorlekar är 0,1, 0,2 eller 0,45 um |
| Proteinbindande kapacitet | |
| Nitrocellulosa har en proteinbindande kapacitet på 80 till 100 | ig / cm2. | PVDF har en proteinbindande kapacitet av 170 till 200 | ig / cm2. |
| Känslighet | |
| Detta har en låg känslighet jämfört med PVDF. | Detta har en hög känslighet. |
| Detektion av lågt uttryckta proteiner | |
| Eftersom känsligheten är låg i nitrocellulosemembran är den inte lämplig för detektering av lågt uttryckta proteiner. | Detta är mer lämpligt för detektering av lågt uttryckta proteiner på grund av dess höga känslighet. |
| Bakgrundsbrus | |
| Detta har lägre bakgrundsbrus | Detta har högre bakgrundsbrus. |
| Interaktioner med proteiner | |
| Proteinmolekyler binder till nitrocellulosemembran genom hydrofoba interaktioner. | Proteiner binder till PVDF-membran genom hydrofoba och dipol-interaktioner. |
| Membranets natur | |
| Nitrocellulosa är skört och bräckligt. Men versioner av nitrocellulosa är tillgängliga, och de är resistenta. | PVDF är mer hållbart och har högre kemisk resistans. |
| Förmåga att ta bort och återanvända | |
| Nitrocellulosa kan ha svårigheter att strippa och reprobera utan att förlora signalen. | PVDF är idealisk för reprobing och sequencing applikationer. |
| Lämplighet | |
| Nitrocellulosa är idealisk för att detektera proteiner med låg molekylvikt. | PVDF är mer lämplig för detektering av proteiner med hög molekylvikt. |
| Andra användningsområden | |
| Nitrocellulosa kan användas för nukleinsyraanalys och dot / slot-blotting. | PVDF kan användas för proteinsekvensering och fastfas-analyssystem. |
| Kosta | |
| Detta är billigare än PVDF-membran. | Detta är dyrare än nitrocellulosamembran. |
| Behov av förvätning | |
| Nitrocellulosemembran kräver inte förbehandling med metanol | PVDF-membran kräver förbehandling med metanol. |
Sammanfattning - Nitrocellulosa vs PVDF
Nitrocellulosemembran var de första membranen som användes kommersiellt för sidoflödesanalys. De har en hög kapacitet för att absorbera proteiner. Därför används nitrocellulosamembran i western blotting. PVDF är en annan typ av membran som används i western blotting och det har också en hög proteinabsorptionskapacitet. Båda typerna används i western blotting för proteinanalys. Emellertid har PVDF-membran mer speciella egenskaper, vilket gör dem mer lämpliga än nitrocellulosemembran för western blotting. Men nitrocellulosamembran är mer lämpliga för detektering av proteiner med låg molekylvikt, PVDF-membran är mer lämpliga för detektering av proteiner med hög molekylvikt. Detta är skillnaden mellan nitrocellulosa och PVDF membran.
Image Courtesy:
1. "Western blot transfer" Av Bensaccount på engelska Wikipedia (CC BY 3.0) via Commons Wikimedia
Referens:
1.Luque-Garcia, Jose L., Ge Zhou, Tung-Tien Sun och Thomas A. Neubert. "Användning av nitrocellulosamembran för proteinkarakterisering genom matrisassisterad laserdesorption / joniseringsmasspektrometri." Analytisk kemi. U.S. National Library of Medicine, 15 juli 2006. Web. 28 mars 2017
2. "Molekylära markörer och växtbioteknik." Google Böcker. N.p., n.d. Webb. 28 mars 2017
3.Monday, 8 april, 2013 Tweet. "The Magic's In Membrane: Välj klokt för Best Western Blot Results." Biocompare. NP, 08 Apr. 2013. Web. 28 mars 2017
