Skillnad mellan direkt och indirekt ELISA

Huvudskillnad - Direkt mot indirekt ELISA
 

En enzymbunden immunoanalys (ELISA), även känd som enzymimmunanalys, är ett serologiskt test som detekterar antikroppar i blodet. Det används som ett diagnostiskt verktyg för att ta reda på om patienten har utsatts för en viss typ av virus eller annat infektiöst medel (antigen) och om kroppen har producerat antikroppar mot infektionen. ELISA kan också identifiera tidigare och aktuella infektioner. ELISA används därför ofta som ett förskrivningsprov av läkare före en djup analys av sjukdomar. Detta test kan utföras i laboratoriet genom att ta ett blodprov från patienten. Det finns två typer av ELISA-test: direkt ELISA och indirekt ELISA. Den viktigaste skillnaden mellan direkt och indirekt ELISA är det indirekt ELISA är känsligare och kräver tillsättning av en sekundär antikropp medan direkt ELISA är mindre känslig och använder endast en primär antikropp.

INNEHÅLL
1. Översikt och nyckelskillnad
2. Vad är Direct ELISA
3. Vad är indirekt ELISA
4. Jämförelse vid sida vid sida - Direkt mot indirekt ELISA
5. Sammanfattning

Vad är Direct ELISA?

ELISA är ett sjukdomsdiagnostiskt test som utförs för att identifiera närvaron av specifika antigener eller antikroppar i blodet. Det är gjort som en plattanalys. Det använder antikroppar kopplade till lätt analyserade enzymer. Antigenernas närvaro i serumprovet binder med specifika antikroppar kopplade till enzymer. I det sista steget tillsätts ett specifikt substrat för att reagera med enzymet. Enzymet omvandlar substratet till en färgad eller signalproducerande produkt. Färgförändringen i det kemiska substratet avslöjar närvaron av en särskild antikropp i serumprovet. Direkt ELISA-test använder endast en primär antikropp kopplad till enzymet. Vid bindning till antigenet förändras det snabbt färgen, vilket indikerar närvaron av det infektiösa medlet i blodet. Intensiteten hos signalerna är dock svagare i direkt ELISA eftersom epitoperna är begränsade till bindning av antigenerna. Följaktligen är direkt ELISA mindre känsligt jämfört med indirekt ELISA.

Figur 01: Direkt ELISA-test

Vad är indirekt ELISA?

ELISA kan utföras med användning av två typer av antikroppar nämligen; primär antikropp och sekundär antikropp. Indirekt ELISA-verktyg använder båda typerna av antikroppar för att förstärka signalerna för bättre detektering. Indirekt ELISA-teknik utförs enligt följande.

1. Plattor inkuberas med antigener och tvättas för att blockera icke-specifik bindning.
2. Därefter tillsätts primära antikroppar och tvättas.
3. Enzymbunden sekundär antikropp tillsätts och tvättas.
4. Ett substrat tillsättes och får reagera med enzymer.
5. Signaler detekteras och närvaron eller frånvaron av det specifika antigenet i provet identifieras.

I indirekt ELISA-test kan flera sekundära antikroppar binda till en enda primär antikropp. Sekundära antikroppar är kopplade till lätt analyserade enzymer. Därför kan en bindning göra en stark signal på grund av mer än en interaktion. Därför är indirekt ELISA känsligare än direkt ELISA. Emellertid kan indirekt ELISA göra icke-specifika signaler på grund av korsreaktioner av de sekundära antikropparna.

Figur 02: Indirekt ELISA-test

Vad är skillnaden mellan direkt och indirekt ELISA?

Direkt mot indirekt ELISA
Direkt ELISA är mindre känslig jämfört med indirekt ELISA.	Indirekt ELISA är känsligare.
Tid tagen
Direkt ELISA-test är en snabb process.	Indirekt ELISA är tidskrävande.
Användning av antikroppar
Endast en typ av antikroppar (Primär antikroppar) används i direkt ELISA.	Primär och sekundär antikroppar används för indirekt ELISA.
Länk med enzymer
Primär antikroppar är kopplade till enzymer.	Sekundära antikroppar är kopplade till enzymer.
Korsreaktivitet hos andra antikroppar
Direkt ELISA eliminerar korsreaktiviteten hos andra antikroppar.	Indirekt ELISA påverkas med korsreaktivitet hos andra antikroppar.
signaler
Signalerna är svaga jämfört med indirekt ELISA.	Signaler amplifieras i indirekt ELISA. Därför är det lätt att upptäcka.

Sammanfattning - Direkt mot indirekt ELISA

ELISA är en biokemisk teknik som används huvudsakligen i immunologi för att detektera närvaron av en antikropp eller ett antigen i ett blodprov hos en patient. Det kan utföras via två processer som kallas direkt eller indirekt ELISA. Direkt ELISA-test använder endast primära antikroppar för att detektera antigenet medan indirekt ELISA använder både primära och sekundära antikroppar. I direkt ELISA märks primära antikroppar medan i indirekta ELISA sekundära antikroppar är märkta. Detta är skillnaden mellan direkt och indirekt ELISA.

referenser
1. "Den enzymbundna immunosorbentanalysen (ELISA)." Bulletin of the World Health Organization. U.S. National Library of Medicine, 1976. Web. 29 mars 2017
2. Loon, A. M van, J.T. Van Der Logt, F.W. Heessen och J. Van Der Veen. "Enzymbunden immunosorbentanalys som använder märkt antigen för detektion av immunoglobulin M och A-antikroppar i toxoplasmos: jämförelse med indirekt immunofluorescens och dubbel-sandwich-enzymbunden immunosorbentanalys." Journal of Clinical Microbiology. U.S. National Library of Medicine, juni 1983. Web. 29 mars 2017

Image Courtesy:
1. "ELISA-diagram" Av Cavitri - eget arbete (CC BY 3.0) via Commons Wikimedia 
2. "Indirekt ELISA" Av Cawang - eget arbete (CC0) via Commons Wikimedia