Skillnad mellan direkt och indirekt immunfluorescens

De nyckelskillnad mellan direkt och indirekt immunofluorescens är att direkt immunofluorescens använder en enda antikropp som arbetar mot målet av intresse medan den indirekta immunofluorescensen använder två antikroppar för att märka målet av intresse.

Immunofluorescens eller cellbildning är en teknik som används för att märka ett specifikt målantigen med en fluorofor. Här är fluoroforen en fluorescerande kemisk förening som kan återge ljus vid ljus excitation. När en fluorofor binds med målantigenet tillåter det detekteringen av målmolekylen i provet. För att beskriva det vidare, när ett antigen binder med en specifik antikropp kan den konjugeras med fluoroforer. Det är därför lätt att detektera närvaron av målantigenet i provet när det observeras under fluorescensmikroskopet.

Dessutom finns det två typer av immunofluorescens; direkt och indirekt immunofluorescens. Skillnaden mellan direkt och indirekt immunofluorescens ligger huvudsakligen i antalet använda antikroppar och fluoroforkonjugationen. Det vill säga, i direkt immunofluorescens, konjugerar fluoroforen direkt till den primära antikroppen under indirekt immunofluorescens, fluoroforkonjugatet med den sekundära antikroppen.

INNEHÅLL

1. Översikt och nyckelskillnad
2. Vad är direkt immunfluorescens
3. Vad är indirekt immunfluorescens
4. Likheter mellan direkt och indirekt immunfluorescens
5. Jämförelse vid sida vid sida - Direkt mot indirekt immunfluorescens i tabellform
6. Sammanfattning

Vad är direkt immunfluorescens?

Immunofluorescens använder antikroppar för att detektera specifika målantigener. Direkt immunofluorescens är en av de två typerna av immunofluorescens. Vid direkt immunofluorescens involverar en enda antikropp (primär antikropp) och fluoroforen direkt konjugerar med den primära antikroppen. Vid bindning av antikroppen med målantigenet emitterar fluorofor fluorescens som kan detekteras av ett fluorescensmikroskop.

Figur 01: Direkt immunfluorescens

Direkt immunofluorescens är emellertid en dyr metod eftersom de primära konjugerade antikropparna är kostsamma jämfört med de sekundära antikropparna. Det innebär emellertid inte ett ytterligare steg, följaktligen en kortare teknik. Vidare reduceras icke-specifika bindningar i direkt immunofluorescens. Därför är korsreaktiviteten hos arter låg. Men vid upptäckt är känsligheten hos den direkta immunofluorescensen svag i jämförelse med den indirekta immunofluorescensen .

Vad är indirekt immunfluorescens?

Indirekt immunofluorescens är den andra typen av immunofluorescensen som involverar två typer av antikroppar, såsom primära och sekundära antikroppar i märkningen av målantigenet. I denna metod konjugerar fluoroforen med den sekundära antikroppen. Därför innebär denna teknik ett ytterligare steg.

Figur 02: Immunofluorescens

Känsligheten är emellertid hög i denna metod eftersom flera fluoroforer kan konjugeras till sekundära antikroppar och det gör detekteringen lättare. Vidare är indirekt immunofluorescens billigare på grund av att konjugationen av sekundära antikroppar är billigare och enklare. I jämförelse med den direkta immunofluorescensen är arten korsreaktivitet hög i den indirekta metoden.

Vad är likheterna mellan direkt och indirekt immunfluorescens?

• De är två typer av immunofluorescens teknik.
• Primär antikroppar och fluorofor involverar i båda metoderna.
• Även antigen-antikroppsreaktionen sker i båda metoderna.
• Vidare utnyttjar både direkt och indirekt immunofluorescens ett fluorescensmikroskop för detektering av antigen.

Vad är skillnaden mellan direkt och indirekt immunfluorescens?

Immunofluorescens kan vara direkt eller indirekt baserat på fluoroforkonjugationen med de använda antikropparna. Vid direkt immunofluorescens konjugerar fluoroforen med den primära antikroppen, vilken är den enda antikroppen som involverar i denna teknik. I motsats till det, i indirekt immunofluorescens, konjugerar fluoroforen med den sekundära antikroppen, vilken är en av de två typerna av antikroppar som involverar i tekniken. Följaktligen är huvudskillnaden mellan direkt och indirekt immunofluorescens den antikroppstyp som konjugerar med fluoroforen.

Följande infographic ger en sida vid sida jämförelse av skillnaden mellan direkt och indirekt immunofluorescens.

Sammanfattning - Direkt mot indirekt immunfluorescens

Immunofluorescens är en teknik som används för att detektera närvaron av specifika antigener i ett prov. Denna teknik använder specifika antikroppar. Därför konjugerar antikropparna med fluoroforer för att detektera dem med användning av ett fluorescerande mikroskop. Dessutom finns det två typer av immunofluorescens, nämligen direkt och indirekt immunofluorescens. Direkt immunofluorescens involverar en enda antikropp och fluorofor direkt konjugerad till denna antikropp. Indirekt immunofluorescens involverar två antikroppar; primär och sekundär och fluorofor konjugerad till den sekundära antikroppen. Eftersom flera sekundära antikroppar kan binda med en primär antikropp och flera fluorofor kan konjugera med sekundära antikroppar är indirekt immunofluorescens en mer känslig metod än den direkta metoden. Dessutom är den indirekta metoden billigare än den direkta metoden. Således är detta skillnaden mellan direkt och indirekt immunofluorescens.

Referens:

1. "Immunofluorescens." Wikipedia, Wikimedia Foundation, 19 aug 2018. Tillgänglig här 

Image Courtesy:

1. "HSP IF IgA" Av Emmanuelm på en.wikipedia, (CC BY 3.0) via Commons Wikimedia
2. "Immunofluorescens" Av Westhayl618 - eget arbete, (CC BY-SA 4,0) via Commons Wikimedia