Hur fungerar trypsin i cellkultur

Trypsin är ett serinproteas som klyver lysin och argininrester vid C-terminalen av peptider. Det är det mest använda enzymet i cellodling för att frigöra de vidhäftande cellerna från odlingsbehållarens ytor. Trypsin tolereras enkelt av de flesta celltyper som odlas i kulturer. Dess aktivitet kan lätt neutraliseras med tillsats av serum i odlingsmediet. Dessa två egenskaper hos trypsin underlättar deras användning i cellkulturer. Generellt tillsätts trypsin till cellkulturerna med EDTA. Rollen av trypsin i cellkulturer beskrivs i denna artikel.

Viktiga områden som omfattas

1. Vad är Trypsin
     - Definition, Funktioner, Funktion
2. Hur fungerar trypsin i cellkultur
     - Rolle av trypsin i cellodling

Nyckelvillkor: Adhesivproteiner, Celladhesion, Digestivt Enzym, Trypsin, Trypsinisering

Vad är Trypsin

Trypsin är ett matsmältningsenzym som bryter ner proteiner i matsmältningssystemet hos många ryggradsdjur. Det finns i bukspottskörteljuice. Trypsin klyver lysin och argininrester av karboxiterminalen av peptider. Det klöjar emellertid inte dem när dessa två aminosyror följs av pralin. Aktiviteten av trypsin används i många biotekniska processer, och verkan av trypsin är känd som trypsinering eller trypsinproteolys. Kristallstrukturen av trypsin visas i Figur 1.

Figur 1: Trypsin

Optimalt pH för verkan av trypsin är 7,6-8,5. I allmänhet används fenolröd i trypsinanalyser för att övervaka ovanstående pH-intervall. Fenolröd ger en rosa färg vid detta pH-område. Trypsinanalyser utförs på torris. 

Hur fungerar trypsin i cellkultur

Proteinerna på plasmamembranet är ansvariga för en mängd olika funktioner som är nödvändiga för upprätthållandet av cellens normala fysiologiska aktivitet. Vissa plasmamembranproteiner, såsom kadherinfamiljer, är adhesiva proteiner som tjänar som ankare, som kopplar cytoskelettproteinerna till den extracellulära matrisen. Detta hjälper till vid celladhesion och cellmigration. Klisterproteinerna i plasmamembranet visas i figur 2.

Figur 2: Cellhäftande proteiner

I cellkulturer kan trypsin sättas till mediet för att frigöra de vidhäftande cellerna från odlingsbehållarens yta genom att smälta de adhesiva proteinerna. Trypsin frisätter också celler från aggregat genom uppslutning av limproteiner. EDTA läggs också till cellkulturer tillsammans med trypsin för att kelatera divalenta joner i mediet. Kalcium- och magnesiumjoner kan hämma verkan av trypsin. I slutändan bidrar trypsin till att erhålla individuella celler från cellkulturerna, vilket underlättar nedströms bearbetning av cellerna.

Slutsats

Trypsin är ett fotolytiskt enzym som smälter peptider. Trypsin används ofta i cellodling för att erhålla individuella celler som trypsin digererar de adhesiva proteinerna och frigör cellerna i mediet.

Referens:

1. "Trypsininducerad proteomändring under cellunderkultur i däggdjursceller". Journal of Biomedical Science, BioMed Central, 11 maj 2010, Tillgänglig här.

Image Courtesy:

1. "1UTN" Av användare: DrKjaergaard - Egent arbete: Från PDB-fil 1UTN. Skapat med PyMol (Public Domain) via Commons Wikimedia
2. "Cell Adhesion" Av ZabMilenko på English Wikipedia - Överförd från en.wikipedia till Commons by Premeditated Chaos med CommonsHelper (Public Domain) via Commons Wikimedia