Skillnad mellan sydlig nordlig och västlig blotting

De huvudskillnad mellan södra norra och västra blotting är det Southern blotting involverar identifiering av DNA, och Northern Blotting involverar identifiering av RNA, medan Western blotting involverar identifiering av proteiner.

Södra, Norra och Västra är tre blottingstekniker som används för att detektera en specifik DNA-, RNA- eller proteinmolekyl i ett prov. Under blotting överförs makromolekylerna till ett membran från gelén och tillverkas för att binda med en specifik nukleinsyra eller antikropp som hjälper till att detektera.

Nyckelområden

1. Vad är Southern Blotting
     - Definition, Process, Applications
2. Vad är Northern Blotting
     - Definition, Process, Applications
3. Vad är Western Blotting
     - Definition, Process, Applications
4. Vad är likheterna mellan sydlig nordlig och västlig blotting
     - Översikt över gemensamma funktioner
5. Vad är skillnaden mellan södra norra och västra blotting
     - Jämförelse av viktiga skillnader

Nyckelbegrepp

Antikropp, DNA, Elektrofores, Northern Blotting, RNA, Proteiner, Southern Blotting, Western Blotting

Vad är Southern Blotting

Southern blotting är tekniken som används för att detektera en specifik DNA-sekvens i en blandning av DNA. De grundläggande stegen i en Southern blot är som nedan.

Elektrofores - Det separerar DNA-provet i olika band baserat på storleken genom gelelektrofores.

Överföra - Under överföringen placeras ett nitrocellulosamembran i kontakt med gelén och DNA-band rör sig på membranet genom kapillärverkan. 

Detektion av specifika sekvenser - Målsekvensen på membranet hybridiseras med den specifika märkta oligonukleotidsekvensen som kallas hybridiseringsproben. Hybridiseringsproben är kort, 100-500 bp i storlek, enkelsträngad DNA-molekyl. Stränghet, som beror på temperaturen och saltkoncentrationen av hybridiseringsbufferten, påverkar hybridisering. Hög stringens definierad av hög temperatur och låg saltkoncentration ökar hybriditeten specificitet medan låg stringens definierad av låg temperatur och hög salt koncentration minskar specificiteten.

Figur 1: Southern Blotting

Huvudsyftet med Southern Blotting är att detektera en specifik DNA-sekvens i ett prov. Tekniken används i DNA-fingeravtryck, faderskapstestning, offeridentifiering och brottslig identifiering. Det hjälper också vid identifiering av specifika gener, i RFLP (restriktionsfragmentlängdspolymorfism), mutation och identifiering av genomläggning, genetiska sjukdomar och infektionsmedel.

Vad är Northern Blotting

Northern blotting är tekniken som används för att detektera ett specifikt RNA i en blandning av RNA. De grundläggande stegen i en Northern Blot är som nedan.

Elektrofores - Det separerar RNA-provet i enlighet med storleken i olika band.

Överföra - Genom kapillärverkan överförs RNA-band i gelén på membranet.

Detektion av specifika sekvenser - Mål-RNA-sekvensen detekteras genom hybridisering med en märkt oligonukleotidprob som består av DNA.

Figur 2: Northern Blotting

Eftersom Northern Blotting kan identifiera specifik RNA-sekvens i ett prov kan den användas i genuttrycksstudierna. Det kan också hjälpa till vid diagnos av sjukdomar.

Vad är Western Blotting

Western blot är en blottingsteknik som används för att detektera en specifik aminosyrasekvens i en blandning av proteiner. De grundläggande stegen i en Western Blot är som nedan.

Elektrofores - Individuella proteiner separeras baserat på storleken i band genom SDS PAGE.

Överföra - Proteinband i gelén överförs till ett membran genom blotting.

Detektion av specifika proteiner - Membranet med separerade proteiner inkuberas med en primär antikropp som bara binder till det specifika proteinet. En sekundär antikropp, som är märkt med ett enzym, såsom pepparrotperoxidas (HRP) eller alkaliskt fosfatas, används för att detektera den primära antikroppen. När den inkuberas med substratet visualiserar enzymaktiviteten bindningen av antikroppar mot en specifik region på membranet.

Figur 3: Western Blotting

Western blotting kallas också proteinblott eller immunoblottning. Det kan identifiera antalet proteiner i ett prov, närvaro av bakterier och virus i serum och förekomsten av HIV-antikroppar i serumet. Det kan även detektera defekta proteiner. Vidare är western blotting det definitiva testet för hepatit B, Creutzfeldt-Jacob sjukdom, Lyme sjukdom och Herpes.

Likheter mellan sydlig nordlig och västlig blotting

• Southern Blotting, Northern Blotting och Western Blotting är tre blottingstekniker som används för att identifiera en viss typ av makromolekyl inom ett prov.
• De tre stegen i blottingsteknikerna är elektrofores, överföring och detektering.
• Varje teknik kräver denaturering och blockering med överskott, motsvarande makromolekyl.
• Varje teknik har tillämpningar inom bioteknik och medicin.

Skillnad mellan sydlig nordlig och västlig blotting

Definition

Southern blotting hänför sig till ett förfarande för att identifiera specifika sekvenser av DNA medan Northern Blotting avser en anpassning av Southern Blott-proceduren som används för att detektera specifika sekvenser av RNA genom hybridisering med komplementärt DNA och Western blotting hänför sig till en blottningsförfarande som används för att identifiera specifik amino -acid-sekvenser i proteiner.

Utvecklad av

Southern blotting utvecklades av Edward M. Southern 1975. Northern Blotting utvecklades av Alwine och hans kollegor 1979 och Western Blotting utvecklades av George Starks grupp vid Stanford University 1979.

Molecule Detekterad

Southern blotting detekterar specifika DNA-sekvenser, Northern Blotting detekterar specifika RNA-sekvenser, medan Western blotting detekterar specifika proteiner.

Gelelektrofores

Southern blotting involverar Agarose gelelektrofores och Northern Blotting involverar denatureringsformaldehyd-agarosgel medan Western blotting involverar SDS PAGE.

Blotting Method

Både södra och norra blotting innebär kapillär överföring medan Western blotting innebär en elektrisk överföring.

sonder

Southern blotting använder DNA-prober medan Northern Blotting använder cDNA-prober och Western blotting använder primära och sekundära antikroppar.

Ansökan

Southern blotting används för att identifiera specifika gensekvenser och i DNA-fingeravtryck. Northern blotting används i genuttrycksanalys, och Western blotting används vid sjukdomsdiagnos.

Slutsats

Southern blotting identifierar specifik DNA-sekvens, medan Northern Blotting identifierar specifik RNA-sekvens och Western blotting identifierar specifik proteinsekvens i ett prov. Därför är huvudskillnaden mellan de tre blottingsteknikerna den typ av makromolekyl som de upptäcker.

Referens:

1. "Southern Blotting: Princip, Procedure och Application -." ONLINE BIOLOGY NOTES, 4 dec 2017, tillgänglig här
2. Kochunni, Deena T och Jazir Haneef. "Northern Blotting: Princip, procedur och applikationer." Biologiska tentor 4 U, tillgängligt här
3. "Western Blotting Technique: Princip, procedur och tillämpning -." BIOLOGY ONLINE NOTES, 4 dec 2017, tillgänglig här

Image Courtesy:

1. "Figur 17 01 05" Genom CNX OpenStax - (CC BY 4.0) via Commons Wikimedia
2. "Northern blot diagram" Av Ilewieszoośmiornicach - Egent arbete (CC BY-SA 4.0) via Wikimedia Commons   
3. "Western Blotting" Av Cawang - eget arbete (CC0) via Commons Wikimedia