Skillnad mellan SDS Page och Western Blot

Huvudskillnad - SDS Page vs Western Blot
 

Western blotting är en teknik som detekterar ett specifikt protein från ett proteinprov. Denna teknik utförs via flera nyckelsteg: gelelektrofores, blotting och hybridisering. Natriumdodecylsulfatpolyakrylamidgelelektrofores (SDS Page) är en typ av gelelektrofores teknik som används för att separera proteiner i enlighet med deras storlekar (molekylvikter). Western blot är ett specialblad av ett blottningsmembran som används för att överföra samma mönster av proteinerna i SDS-sidan. Den viktigaste skillnaden mellan SDS Page och Western blot är det SDS-sida tillåter separation av proteiner i en blandning medan western blot möjliggör detektion och kvantifiering av ett specifikt protein från en blandning. Båda är användbara i proteinanalysstudier.

INNEHÅLL
1. Översikt och nyckelskillnad
2. Vad är SDS-sida
3. Vad är Western Blot
4. Jämförelse vid sida vid sida - SDS Page vs Western Blot
5. Sammanfattning

Vad är SDS-sida?

SDS-sida är en gelelektrofores teknik som används för proteinseparation. Det används vanligen inom biokemi, genetik, rättsmedicin och molekylärbiologi. När proteinerna extraherats från provet körs de på en gel bestående av SDS och polyakrylamid. SDS är ett anjoniskt rengöringsmedel som används för att linearisera proteiner (denatureringsproteiner) och för att ge en negativ laddning till linjära proteiner proportionella mot deras molekylmassa. Polyakrylamid blir det fasta stödet för gelén. Denaturerade proteiner som är negativt laddade migrerar mot apparatens positiva ände genom gelén. Enligt proteinstorlekarna skiljer migrerande hastigheter mellan proteiner och separation sker. Därför är SDS-sidan användbar för separation av individuella proteiner baserat på deras storlekar.

Framställningen av polyakrylamidgelen för fraktionering av proteiner är ett viktigt steg i SDS-sidan. Den korrekta koncentrationen av polyakrylamid och typen av det använda tvärbindningsmedlet påverkar starkt gelens fysikaliska egenskaper, vilket gör den faktiska separationen av de olika proteinerna. Garnets porstorlekar bör hanteras ordentligt för effektiv separation. SDS Page anses emellertid vara en proteinlösningssystem med hög upplösning.

SDS-sidteknik har en stor begränsning i proteinanalys. Eftersom SDS denaturerar proteiner före separation tillåter det inte detektion av enzymatisk aktivitet, proteinbindande interaktioner, proteinkofaktorer, etc.

Figur 01: SDS-sida

Vad är Western Blot?

Western blotting teknik möjliggör detektion av ett specifikt protein från en proteinblandning och mätning av proteinets kvantitet och molekylvikt. Western blott är membranet som används under blottningsförfarandet för att få spegelbilden av proteinmönstren i SDS-polyakrylamidgelen. Membranet som används för western blotting består mestadels av nitrocellulosa eller polyvinyliden-difluorid (PVDF). Membranet med det överförda proteinet kan användas för att identifiera det önskade proteinet. Det kräver högkvalitativ antikropp för detektering av det önskade proteinet genom hybridisering. Antikroppen binder till sitt specifika antigen och avslöjar närvaron av det önskade antigenet som är ett protein.

Överföring av proteinerna från SDS-polyakrylamidgelen till westernblottet utförs genom elektroblottning. Det är en effektiv och snabb metod som gör att proteinerna elektrofores ut ur gelén och passerar på nitrocellulosamembranet (western blot).

Figur 02: Western Blot

Vad är skillnaden mellan SDS Page och Western Blot?

SDS-sida vs Western Blot
SDS Page är en gelelektrofores teknik.	Western blot är en teknik som utförs på ett membran för att detektera ett specifikt protein från en blandning.
Använda sig av
SDS-sida tillåter separation av proteiner i enlighet med deras storlekar.	Western blot tillåter överföring av proteiner på SDS-sidgelén utan att ändra dess mönster och möjliggör hybridisering med specifika antikroppar.
nackdelar
Protein denaturering, hög kostnad och närvaro av neurotoxinkemikalier är nackdelarna med denna teknik.	Denna teknik är tidskrävande och kräver en bra erfaren personliga och specifika kontrollerade förhållanden.

Sammanfattning - SDS Page vs Western Blot

SDS-sida och western blot är två metoder som är involverade i proteinanalys. SDS-sida möjliggör enkel separation av proteiner på en gel i enlighet med deras molekylvikt. Western blot hjälper till att bekräfta närvaron och kvantiteten av ett specifikt protein genom hybridisering med specifika antikroppar. Detta är skillnaden mellan SDS Page och western blot.

referenser:
1. Blancher, C. och A. Jones. "SDS-PAGE och Western Blotting Techniques." Metoder i molekylär medicin. U.S. National Library of Medicine, n.d. Webb. 27 mars 2017
2. Nowakowski, Andrew B., William J. Wobig och David H. Petering. "Inbyggd SDS-PAGE: Högupplösande elektroforetisk separation av proteiner med retention av naturliga egenskaper, inklusive bundna metalljoner." Metallomics: integrated biometal science. U.S. National Library of Medicine, maj 2014. Web. 27 mars 2017.

Image Courtesy:
1. "SDS-PAGE Electrophoresis" av Bensaccount på engelska Wikipedia (CC BY 3.0) via Commons Wikimedia
2. "Western blot 114A" Av Amanthabagdon - Egent arbete (Public Domain) via Commons Wikimedia