Skillnad mellan immunofluorescens och immunhistokemi

Huvudskillnad - Immunofluorescens vs Immunohistokemi
 

Sjukdomsdiagnostik, som använder molekylärbiologiska metoder, har blivit ett framväxande område av den kliniska laboratorietekniken. Den innehåller alla tester och metoder för att identifiera en sjukdom och förstå orsaken till en sjukdom genom att analysera DNA, RNA eller uttryckta proteiner i en organism. Snabba framsteg inom molekylär diagnostik har gjort det möjligt att grundforskning om smittsamma och icke-smittsamma sjukdomar. Dessa används för att bestämma förändringar i sekvens- eller expressionsnivåer i viktiga gener eller proteiner som är involverade i sjukdom. Immunofluorescens (IF) och Immunohistokemi (IHC) är två sådana allmänt använda tekniker inom cancerbiologi. IF är en typ av IHC där en fluorescensdetekteringsmetod används för analys av monoklonala och polyklonala antikroppar, medan IHC använder kemiska baserade metoder för att detektera monoklonala och polyklonala antikroppar. Detta är nyckelfaktorn mellan IF och IHC.

INNEHÅLL

1. Översikt och nyckelskillnad
2. Vad är Immunofluorescens 
3. Vad är immunohistokemi
4. Likheter mellan immunfluorescens och immunhistokemi
5. Jämförelse vid sida vid sida - Immunofluorescens mot immunhistokemi i tabellform
6. Sammanfattning

Vad är immunfluorescens (IF)?

Immunofluorescens är en detekteringsteknik där antikropparna som används i analysen är märkta med användning av fluorescerande färgämnen eller fluorescerande proteiner för detektionsändamålet. Märkta sekundära antikroppar kan resultera i oönskade bakgrundssignaler; därför är IF-tekniken baserad på märkning den primära antikroppen själv för närvarande för att undvika oönskade signaler under detektering. Genom denna teknik förhindras icke-specifik bindning mellan den primära och den sekundära antikroppen, och det är snabbare, eftersom det inte finns något sekundärt inkubationssteg involverat. Datakvaliteten förbättras också.

Figur 01: Dubbel immunofluorescensfärgning för BrdU, NeuN och GFAP

Fluorkromer eller fluorescerande färgämnen är föreningar som kan absorbera strålning, helst ultraviolett strålning som är upphetsad. När partiklarna når marktillståndet från det exciterade tillståndet avger de strålning som fångas och detekteras av en detektor för att bilda ett spektrum. Det är av stor betydelse att den fluorescerande märkningen är kompatibel och stabil för den speciella reaktionen och den bör vara ordentligt konjugerad till antikroppen för att erhålla exakta resultat. Ett av de mest använda fluorokromerna är fluoresceinisotiocyanat (FITC), som är av grön färg, med absorptions- och utsläppstoppvåglängder på 490 nm respektive 520 nm. Rhodamin, ett annat medel som används i IF, är röd i färg och har distinkta absorptions- och utsläppstoppvåglängder på 553 nm och 627 nm.

Vad är immunohistokemi (IHC)?

IHC är en molekylär testmetod som praktiseras för att identifiera och bekräfta närvaron av antigenet i målcellen. Målcellen kan vara en infektionspartikel, en mikrobiell patogen eller en malign tumörcell. IHC använder monoklonala och polyklonala antikroppar för att bestämma närvaron av antigener närvarande på cellytan hos målcellerna. Tekniken är baserad på antigen-antikroppsbindning. En detekteringsmarkör är konjugerad till dessa antikroppar för att detektera närvaron eller frånvaron av det specifika antigenet. Dessa markörer kan vara kemiska markörer såsom enzymer, fluorescensmärkta antikroppar eller radiomärkta antikroppar.

Figur 02: Mus-hjärnskiva fläckad av immunohistokemi

Den mest populära tillämpningen av IHC är i cancercellbiologi att identifiera förekomsten av maligna tumörer, men den används också för att upptäcka infektionssjukdomar.

Vad är likheterna mellan immunofluorescens och immunhistokemi?

• Immunofluorescens och immunhistokemi sker under in vitro-betingelser.
• Båda teknikerna är baserade på antigen-antikroppen
• Båda är mycket snabba tekniker.
• Resultaten av teknikerna är reproducerbara.
• Båda har förbättrad datakvalitet.
• Dessa tekniker används vid diagnostik för cancer och infektionssjukdomar.

Vad är skillnaden mellan immunfluorescens och immunhistokemi?

Immunofluorescens vs Immunohistokemi
IF är en detekteringsteknik där antikropparna som används i analysen är märkta med användning av fluorescerande färgämnen eller fluorescerande proteiner för detektion.	IHC är en detekteringsteknik där antikropparna som används i analysen är märkta med användning av kemikalier eller radioaktiva element för detektering.
Noggrannhet
Noggrannhet är högre i IF-teknik jämfört med IHC.	Noggrannheten är lägre i IHC.
specificitet
IF är mer specifik.	IHC är mindre specifik.

Sammanfattning - Immunofluorescens vs Immunohistokemi

Molekylära mekanismer har medfört många förändringar inom medicinområdet, vilket ger upphov till avancerade molekylära testmetoder som har medfört revolutioner inom diagnostikområdet. Dessa uppfinningar har lett till en snabb och korrekt identifiering och bekräftelse av sjukdomen, vilket möjliggör en framgångsrik administrering och produktion av läkemedel. Dessa tekniker används också i farmakologi för att hitta målen för droger och för att bekräfta läkemedlets farmakokinetiska egenskaper under läkemedelsmetabolism. IF och IHC är två diagnostiska metoder som bygger på begreppet antigen och antikroppsbindning, även om detekteringsmetoden i båda teknikerna skiljer sig åt. IF använder principen om fluorescens för att detektera antigenet och IHC använder konceptet för kemisk konjugation för att detektera antigenet. Detta är skillnaden mellan IF och IHC.

Ladda ner PDF-versionen av immunfluorescens vs immunohistokemi

Du kan hämta PDF-versionen av den här artikeln och använda den för offlineändamål enligt citationsnotat. Var god ladda ner PDF-version här Skillnaden mellan immunfluorescens och immunhistokemi.

referenser:

1. Aoki, Valéria, et al. "Direkt och indirekt immunofluorescens." Anais Brasileiros de Dermatologia, SociedadeBrasileira de Dermatologia, Tillgänglig här. Åtkomst 25 aug 2017.
2. Duraiyan, Jeyapradha, et al. "Applikationer av immunhistokemi." Journal of Pharmacy & Bioallied Sciences, Medknow Publications & Media Pvt Ltd, aug. 2012, Tillgänglig här. Åtkomst 25 aug 2017.

Image Courtesy:

1. "Dubbel immunofluorescensfärgning för BrdU, NeuN och GFAP" Med Ma M, Ma Y, Yi X, Guo R, Zhu W, Fan X, Xu G, Frey WH 2, Liu X. - Intranasal leverans av transformerande tillväxtfaktor- beta1 hos möss efter stroke minskar infarktvolymen och ökar neurogenesen i subventrikulärzonen; PMID 19077183 (CC BY 2.0) via Commons Wikimedia
2. "Hypothalamus av en musvävnad färgad av ABC-immunohistokemi" Genom zabbn - eget arbete (CC BY-SA 3.0) via Commons Wikimedia