I samband med mikroskopi anses färgning som ett viktigt steg under förbättring av kontrast av mikroskopisk bild, speciellt för att markera olika strukturer i biologiska vävnader. Under färgning av perifert blod och benmärgsutstryk används Wright och Giemsa fläckar. Dessa fläckar är kända som Romanowsky fläckar. Båda dessa fläckar består av viktiga komponenter: oxiderad metylenblå, eosin Y och azurblå B färgämnen. Funktionen av metylenblå och azurblå B är att fläcka kärnan med färger som varierar från blå till lila. Dessa fläckar används i stor utsträckning under studien av röd blodcellsmorfologi och under utförandet av differentialantalet vita blodkroppar. Diagnos av olika sjukdomstillstånd, såsom leukemi, kan uppnås genom Romanowsky-färgprocedurer. Wright-färgning används för att differentiera blodkroppar som består av en blandning av eosin och metylenblåfärger. Giemsa-färgning utnyttjas under färgningen av bakterieceller såväl som mänskliga celler och kan kombineras med Wright-fläck för att utveckla Giemsa Wright-fläck. Detta är nyckelfaktorn mellan Giemsa-fläck och Wright-fläck.
Giemsa fläck används för cytogenetik och histopatologisk diagnos av parasiter av malaria och andra parasitära sjukdomar. Giemsa fläck kan också betraktas som en grundläggande fläck i klassificerande lymfom i klassificeringen av Kiel. Giemsa fläck behövs för Giemsa banding som vanligtvis kallas G-banding. Giemsa banding används för att fläcka kromosomer och används också för att skapa karyogram. Kromosomala abnormiteter som translokationer och omarrangemang identifieras genom Giemsa banding. Giemsa fläck används i histologi på grund av dess högkvalitativa färgning av kärnmembranet och kromatinet, metakromasien hos vissa cellulära komponenter och de olika egenskaperna hos cytoplasmisk färgning baserat på celltypen.
Figur 01: Giemsa Stain
Giemsa-lösningen innehåller metylenblått, Azure B och eosin och fläcken framställs kommersiellt med användning av Giemsa-pulver. Stabiliteten hos fläcken beror på metylen azur och dess blandning tillsammans med metylenblå som bildar ett eosinat. Giemsa-fläck är speciellt för fosfatgrupper i DNA-strängen och det fäster fast vid de områden där en hög mängd adenin-tyminbindningar är närvarande. I Giemsa-färgningsmetoden placeras ett tunt lager av provet initialt på en mikroskopisk glid tillsammans med några droppar ren metanol i ca 30 sekunder. Därefter nedsänks glidbanan i 5% Giemsa fläcklösning, vilken beredes nyligen, i ca 20-30 minuter. Slutligen tvättas gliden med kranvatten och lämnas till torr. Giemsa fläck är känd som en differentiell fläck eftersom Wright's-Giemsa-fläcken bildas när Wrights fläck kombineras med Giemsa. Därför kan den användas vid studier av patogena bakterier kopplade till humana celler. Här färgas de mänskliga cellerna och bakteriecellerna deferentially och lila och rosa färger observeras.
Wrights fläck är uppkallad efter James Homer Wright som modifierade Romanowsky fläcken. Wrights fläck används för att skilja blodkroppstyper eftersom det bidrar till att skilja mellan typer av blodkroppar. Som ett resultat kan infektioner diagnostiseras genom att observera antalet vita blodkroppar. Fläcken är en blandning av eosin, som är röd i färg och metylenblåfärger. Wrights fläck används för att fläcka och observera urinprover, perifera blodutsläpp och benmärgsaspirat under ljusmikroskop. Wrights fläck används i färgkromosomer i cytogenetik för att främja diagnosen av flera sjukdomar och syndrom. Urinproverna som färgas med Wrights fläck identifierar eosinofilerna som indikerar en urinvägsinfektion.
Figur 02: Wright Stain
I Wrights fläckprocess framställs en lufttorkad blodfilm och Wright-färg appliceras och lämnas i 3 minuter. Därefter tillsätts bufferten med en lika stor mängd fläcken, blandas försiktigt och lämnas i 5 minuter. Glidret hålls horisontellt och tvättas väl med neutralt destillerat vatten. Slutligen torkas den och observeras under mikroskopet.
Giemsa Stain vs Wright Stain | |
Giemsa fläck är en differentiell färgningsteknik som används främst för färgning av bakterieceller och även mänskliga celler. | Wright-fläck är en differentiell färgningsteknik som användes huvudsakligen i färgprocedurerna av blodutsprutningar, urinprover och benmärgsaspirat. |
Färgämnen är en väsentlig laboratorie teknik som används vid mikroskopi som används för att förbättra kontrast av den mikroskopiska bilden. Giemsa fläck och Wright Stain tillsammans känd som Romanowsky fläckar involverar i utför differential vita blodkroppar och studerar cellmorfologi av röda blodkroppar. Oxiderad metylenblå, eosin Y och azurblå B-färgämnen är viktiga komponenter i Romanowsky-fläckar. Primärt används Giemsa-fläck under färgning av bakterieceller, men det kan även användas för humana celler. Wright-färgning används i stor utsträckning under färgning av blodutslag, urinprover och benmärgsaspirat. Detta är skillnaden mellan Giesma-fläck och Wrights fläck.
Du kan hämta PDF-versionen av den här artikeln och använda den för offlineändamål enligt citationsnotat. Vänligen ladda ner PDF-version här. Skillnaden mellan Giemsa Stain och Wright Stain
1. Barcia, J. J. "Giemsa fläcken: dess historia och tillämpningar." Internationell tidskrift för kirurgisk patologi., U.S. National Library of Medicine, juli 2007, Tillgänglig här. Åtkomst 12 september 2017
2. Krafts, K P och S E Pambuccian. "Romanowsky färgning i cytopatologi: historia, fördelar och begränsningar." Bioteknik & histokemi: Offentliggörande av Biological Stain Commission., U.S. National Library of Medicine, apr 2011, Tillgänglig här. Åtkomst 12 september 2017
1. "Trypanosoma-evansi-rått-blod-Giemsa-fläck" av Alan R Walker - eget arbete (CC BY-SA 3.0) via Commons Wikimedia
2. "Mastcell, benmärgsaspirat, Wright Stain (5916735712)" Av Ed Uthman från Houston, TX, USA - Mastcell, Benmärgsaspirat, Wright StainUploaded by CFCF (CC BY 2.0) via Commons Wikimedia