Skillnad mellan PCR och realtid PCR

PCR vs realtid PCR

PCR- eller polymeras kedjereaktion är en revolutionerad upptäckt i modern molekylärbiologi, som utvecklades första gången av kemisten Kary Mullis 1983. Det gör att en enda sekvens i ett komplext DNA kan amplifieras för analys. Grundprincipen för PCR är att två primrar, vilka är komplementära mot de motsatta strängarna i en DNA-sekvens, är orienterade mot varandra; Primerna producerar komplementära strängar, vilka vardera innehåller den andra primern. Följaktligen är resultatet en stor kvantitet av en sekvens som motsvarar DNA som ligger mellan de två primrarna. DNA-polymerasenzym används för att förlänga primrarna i PCR. DNA-polymeras är ett termostabilt enzym och det har förmågan att överleva vid höga temperaturer (94 till 95 ° C) som används för denaturering av mall-DNA.

PCR innefattar tre steg, nämligen upprepade omgångar av denaturering, glödgning av primrar och syntes av DNA. En termocyklermaskin används för att utföra denna reaktion så att den kan programmeras för att ändra temperaturerna snabbt och noggrant. Applikationer av PCR är brottsutredningar, DNA-fingeravtryck, upptäckt av patogener och analys av DNA från tidiga humana arter.

Vad är konventionell PCR?

Det finns tre huvudstadier av konventionell PCR, nämligen; DNA-amplifieringsstadiet, separation av PCR och detektering av produkter. Separering av DNA-segment görs vanligen genom agarosgelelektrofores. Produkterna färgas sedan med etheiduimbromid. Slutligen uppnås detektion genom visualisering av band på geler under UV-ljus. Därför uttrycks de slutliga resultaten av konventionell PCR inte som siffror. Normalt kan den konventionella PCR bara detektera en enda parameter.

Vad är realtids-PCR?

Realtids-PCR kan detektera amplifiering av produkter, eftersom produkterna syntetiseras. Med utvecklingen av teknik har PCR blivit en mycket populär teknik, speciellt för detektering och identifiering av bakterier i livsmedel. Realtids PCR använder ett fluorescerande färgsystem och termocykler utrustad med fluorescerande detekteringsförmåga.

Vad är skillnaden mellan konventionell PCR och realtid PCR?

• Konventionell PCR är mer tidskrävande eftersom den använder gelelektrofores för att analysera de amplifierade PCR-produkterna. I kontrast är realtids-PCR mindre tidskrävande eftersom det kan detektera amplifieringar under reaktionens tidiga faser.

• PCR i realtid samlar data i den exponentiella tillväxtfasen av PCR medan traditionell PCR samlar data vid reaktionens slutpunkt.

• Slutpunktsresultaten från den konventionella PCR kan inte vara mycket exakt, men resultaten av realtids-PCR är mycket exakta.

• Realtids-PCR är känsligare än konventionell PCR.

• Konventionell PCR har mycket dålig upplösning, medan realtids-PCR kan upptäcka mycket små förändringar på grund av den höga upplösningen.

• Slutpunktsdetektering av konventionell PCR har ett kort dynamiskt område, medan realtids PCR-detektering har ett brett dynamiskt intervall.

• Till skillnad från konventionell PCR finns automatiska detekteringstekniker i realtid PCR.

• Konventionell PCR är mycket sofistikerad och arbetsintensiv mer än realtids-PCR.

• Till skillnad från realtids-PCR kan konventionell PCR inte diskriminera mellan döda och levande bakterier.

• Realtids PCR använder fluorescerande färgsystem för att detektera produkterna medan konventionell PCR använder etidiumbromid och UV-ljus för att visualisera band i agarosgelmediet.