Varför används värme i Endospore-färgning

En differentiell färgprocess används vid färgning av endosporier. Malakitgrön är den primära fläcken som fläckar både vegetativa celler och endosporier i provet. Då bidrar användningen av värme till att penetrera den primära fläcken till endosporan. Efter avfärgning används motstain safranin för att fläcka bakgrunden. 

Två patogener som kallas Bacill och Clostridium producera metaboliskt inaktiva endosporar för att motstå skadliga miljöförhållanden. Eftersom endosporer orsakar ett antal dödliga sjukdomar är identifieringen av dem ganska viktig i kliniska prover.

Viktiga områden som omfattas

1. Vad är Endospores
    - Definition, fakta
2. Vad är Endospore-färgning
    - Tekniker för Endospore-färgning
3. Varför används värme i Endospore-färgning
     - Användning av värme

Nyckelord: Endospores, Värme, Malakitgröna, Porr, Vegetativa celler

Vad är Endospores

En endospor är en resistent struktur som produceras av någon patogen bakteriell genera, såsom Bacill och Clostridium för att överleva under ogynnsamma miljöförhållanden. Dessa ogynnsamma förhållanden kan vara värme, uttorkning, strålning eller kemikalier. Processen för produktion av endosporer från vegetativa celler kallas sporulation. Det kan ta 8-10 timmar att slutföra processen. Endosporer kan ligga inuti bakteriecellen eller kan existera som fria sporer. Endosporedannelsen visas i Figur 1.

Figur 1: Endosporeformation

Endosporer är metaboliskt inaktiva eller vilande. De innehåller en liten mängd cytoplasma och DNA täckt av ett skyddande ytterhölje. Cellväggen består av dipikolinsyra, vilket ger värmebeständiga egenskaper till endosporan. Endosporer spirer för att producera nya organismer när miljöförhållandena blir gynnsamma. Behandlingen av fuktig värme vid 121 ° C i 15 minuter kan förstöra bakteriella endosporer. 

Vad är Endospore-färgning

Endosporefärgning är en differentierad färgprocess, där olika strukturer i provet färgas i olika färger. Det möjliggör identifiering av endosporer från vegetativa celler. Standard-endosporfärgningsprocessen är Schaeffer-Dulton-teknik. Den primära fläcken i denna teknik är malakitgrön, och motståndet är safranin.

Schaeffer-Dulton Technique - Förfarande

1. Efter smearing på en mikroskopdia, låt bakterieprovet mätta med malakitgrönlösningen.
2. Värm sedan gliden försiktigt i 3-5 minuter tills färgämnet börjar avdunsta.
3. Låt sliden svalna och tvätta den med vatten för avfärgning.
4. Skölj slutligen skenan efter motstrykning.
5. lufttorka bilden och observera den under ett mikroskop.

Här färgas endosporerna grönt med malakitgrönt och vegetativa celler färgas i rosa färg med safranin. Stained endospores med Schaeffer-Dulton teknik visas i figur 2.

Figur 2: Endosporer (gröna) och Vgetative celler (rosa)

En alternativ teknik för endosporefärgning kan identifieras känd som doners metod. Endosporer färgas i rött i denna metod.

Varför används värme i Endospore-färgning

Keratinbeklädnaden av endosporar motstår färgning. Därför måste den primära fläcken tvingas in i endosporan. Användningen av värme är att förbättra penetrationen av den primära fläcken i endosporan. Sliden med malakitgrön kan värmas upp till 3-5 minuter. Uppvärmningstiden är direkt proportionell mot mängderna av färgämnen som tränger in i endosporernas vägg. Längre uppvärmningstider gör porer på endosporväggen, vilket underlättar penetreringen av fler färgämnen.  

Slutsats

Endosporer är reproduktiva celler av de flesta patogena bakterier. Därför är identifieringen av endosporor i ett prov kritisk vid diagnostik.

Referens:

1. "Endospore Stain - Förstå definitioner, tekniker och procedurer." MicroscopeMaster, Tillgänglig här.

Image Courtesy:

1. "Endospore Formation" av Farah, Sophia, Alex - eget arbete (CC BY-SA 4.0) via Wikimedia Commons
2. "Bacillus subtilis Spore" Av Y tambe (original uppladdare) - Egent arbete (CC BY-SA 3.0) via Commons Wikimedia