Skillnad mellan gelelektrofores och SDS-sida
Share
De huvudskillnad mellan gelelektrofores och SDS PAGE är det gelelektrofores är en teknik som används för att separera DNA, RNA och proteiner medan SDS PAGE är en typ av gelelektrofores som används huvudsakligen för att separera proteiner. I allmänhet ger SDS PAGE en bättre upplösning än den vanliga gelelektroforesen.
Gelelektrofores och SDS PAGE är tekniker inom bioteknik som hjälper till att separera makromolekyler baserat på laddning och storlek. Typiskt använder gelelektrofores agarosgelgelstickar för separationen medan SDS-PAGE använder polyakrylamidgelstickar.
Viktiga områden som omfattas
1. Vad är Gel Electrophoresis
- Definition, Förfarande, Viktighet
2. Vad är SDS PAGE
- Definition, Förfarande, Viktighet
3. Vad är likheterna mellan gelelektrofores och SDS-sida
- Översikt över gemensamma funktioner
4. Vad är skillnaden mellan gelelektrofores och SDS PAGE
- Jämförelse av viktiga skillnader
Nyckelord: agaros, DNA, gelelektrofores, polyakrylamid, proteiner, SDS-sidor
Vad är Gel Electrophoresis
Gelelektrofores är en teknik som separerar fragment av makromolekyler, såsom DNA, RNA och proteiner baserat på deras storlek och laddning. Under gelelektrofores rör sig makromolekylerna under inverkan av ett elektriskt fält på en gelmatris, som innehåller porer genom vilka makromolekylerna rör sig. Gelelektrofores är den allmänna tekniken som analyserar DNA från PCR, RFLP, kloning, DNA-sekvensering eller blottingsteknik. Nanopartiklar kan också separeras genom gelelektrofores. Gelsteken framställes från en polysackarid som kallas agaros härrörande från tång. Agarosgeler består av långkedjiga agarosmolekyler sammankopplade som en spindelväv. De video 1 beskriver framställningen av en agarosgel.
Både DNA och RNA innehåller fosfatgrupper vid var och en av deras monomerenukleotid. Följaktligen har de lika negativ laddning genom molekylen. Dessutom migrerar de mot den positiva elektroden under det elektriska fältet. Migrationshastigheten beror på nukleinsyrans storlek. Kortare molekyler migrerar snabbare genom porerna, medan de större tar lite tid.
Figur 1: DNA-band på en agarosgel
Vad är SDS PAGE
SDS PAGE (natriumdodecylsulfat-polyakrylamidgelelektrofores) är en analytisk teknik som användes för att separera laddade molekyler baserat på storleken. I denna process används SDS för att isolera proteiner genom att denaturera dem. Som SDS är ett tvättmedel; Den tertiära strukturen av proteiner störs av den, vilket bringar det vikta proteinet ner i en linjär molekyl. Dessutom täcker den den linjära proteomolekylen med en likformig negativ laddning. SDS PAGE består av två geler med olika koncentrationer. Det övre skiktet kallas stapelgelen till vilken proven laddas medan bottenskiktet kallas upplösningsgelén. Polyakrylamidkoncentrationen av stapelgel är 3,5-4% (stor porstorlek) och det koncentrerar proteiner i ett band. Polyakrylamidkoncentrationen i upplösningsgelén är 4-20% (liten porstorlek) och separerar proteiner baserat på deras storlek. De video 2 visar framställning av en SDS-sida.
SDS PAGE ger en snabb separation av proteiner som hjälper efterföljande analys såsom Western blotting.
Figur 2: Proteinband på SDS-PAGE
Eftersom upplösningskraften hos SDS PAGE är högre än en vanlig agarosgel hjälper SDS PAGE att separera små DNA-fragment med 5-500 bp i storlek.
Likheter mellan gelelektrofores och SDS-sida
- Gelelektrofores och SDS PAGE är tekniker som separerar makromolekyler baserat på deras laddning och storlek.
- Båda teknikerna använder en gelsticka med små porer genom vilka makromolekyler rör sig.
- Drivkraften är den potentiella skillnaden mellan de två elektroderna.
Skillnad mellan gelelektrofores och SDS-sida
Definition
Gelelektrofores: Tekniken användes för att separera fragment av makromolekyler, såsom DNA, RNA och proteiner baserat på deras storlek och laddning
SDS PAGE: En analytisk teknik som används för att separera laddade molekyler baserat på storleken
Komposition
Gelelektrofores: Jämn genom hela gelén; bestående av agaros
SDS PAGE: Två geler med olika koncentrationer; bestående av polyakrylamid
Kör konfiguration
Gelelektrofores: Horisontell körning
SDS PAGE: Vertikal körning
Gjutningsmetodik
Gelelektrofores: Ställer när det svalnar
SDS PAGE: Sätter genom en kemisk reaktion
Porstorlek
Gelelektrofores: Porstorlek är inte enhetlig; högre agaroskoncentrationen, mindre porstorleken
SDS PAGE: Porstorleken är enhetlig; förhållandet mellan akrylamid och bis-akrylamid bestämmer porstorleken
Koncentration
Gelelektrofores: 0,5-2%
SDS PAGE: 6-15%
Separation
Gelelektrofores: 50-20.000 bp nukleinsyror
SDS PAGE: 5-250.000 Da proteiner
Betingelser
Gelelektrofores: Körs normalt under naturliga förhållanden
SDS PAGE: Denatureringsbetingelser
Förberedelse
Gelelektrofores: Enkel
SDS PAGE: En komplex process
färgning
Gelelektrofores: Med etidiumbromid
SDS PAGE: Coomassie-färgning eller silverfärgning
Slutsats
Gelelektrofores är en analytisk teknik som separerar makromolekyler som DNA, RNA och proteiner baserat på deras storlek. SDS PAGE är en typ av gelelektrofores som huvudsakligen används för att separera proteiner under denatureringsbetingelser. SDS PAGE har en högre upplösningskraft jämfört med vanlig gelelektrofores. Huvudskillnaden mellan gelelektrofores och SDS PAGE är typen av makromolekyler separerade och deras procedur.
Referens:
1. "Gel Electrophoresis." Khan Academy, tillgänglig här
2. "SDS-polyakrylamidgelelektrofores (SDS-PAGE)." Diamantina-institutet, 26 april 2017, tillgängligt här
Image Courtesy:
1. "Gelelektrofores 2" Von Mnolf - Foto taget i Innsbruck, Österrike (CC BY-SA 3.0) via Wikimedia Commons
2. "Coomassie3" Av Yikrazuul - Egent arbete (CC BY-SA 3.0) via Commons Wikimedia
