Skillnad mellan övergående och stabil transfektion
Share
Huvudskillnad - Övergående mot stabil transfektion
Transfektion är en process som är involverad i genöverföringen av eukaryota celler med kemiska eller fysiska metoder. Transfektion kan klassificeras i två huvudtyper som heter transient transfektion och stabil transfektion. Under transient transfektion misslyckas genen av intresse att integrera med värdgenomet och uttrycks temporärt inom värd för en kort sikt, medan den gen som intresserar integreras i värdtransgenet med värdgenomet och uppbärs på lång sikt i flera generationers. Detta är nyckelfaktorn mellan övergående och stabil transfektion. I båda fallen är transfektion framgångsrik, och gener uttrycks.
INNEHÅLL
1. Översikt och nyckelskillnad
2. Vad är transienttransfektion
3. Vad är stabil transfektion
4. Jämförelse vid sida vid sida - Övergående mot stabil transfektion
5. Sammanfattning
Vad är transienttransfektion?
Transfektion är ett viktigt verktyg för att införa gener i eukaryota celler. Bland de två typerna av transfektion är transient transfektion ett vanligt sätt vid genöverföring. Genom en vektor transformeras främmande gener inuti värdceller. När utländsk DNA går in i värdcellen har den två alternativ. Det kan antingen integrera med värdgenomet och replikera, eller stanna inuti utan att integrera i genomet. Övergående transfektion uppvisar det temporära uttrycket av de införda generna utan att integrera i värdgenomet. Gen uttrycker och producerar det kodade proteinet tills cellen delar upp. På grund av integrationens oförmåga kan den dock inte replikera och ingå i kommande generationer. Denna typ av transfektion är framgångsrik under en kort tidsperiod. Under celldelning eller på grund av några andra faktorer utsätts främmande DNA för nedbrytning. Övergående transfektion visas när det främmande DNAet är i form av höggradigt spolat DNA.
Figur 01: Transienttransfektion
Vad är stabil transfektion?
Stabil transfektion visar framgångsrik utländsk genintegration i värdgenomet. När väl utländsk DNA går in i värdcellen, integreras en del av det främmande DNA-värdet med värdgenomet och blir en del av det. Därför replikerar främmande DNA också och övergår till kommande generationer när värdgenomet replikerar. Denna typ av transfektion är komplex och sällsynt. På grund av den stabila transfektionen i genomet uppbärs emellertid denna egenskap under en längre period av flera generationer.
Stabil transfektion är en svår process och kräver en effektiv leverans av DNA och cellinventering av det främmande DNA i dess genom. Därför gynnar linjärt DNA den stabila transfektionen än cirkulär DNA. Dock är stabil transfektionshastighet ungefär en av 104 transformerade celler. Stabil transfektion kan observeras genom kotransfomering av en selekterbar markör och utförande av det artificiella urvalet på ett medium.
Figur 02: Stabil transfektion
Vad är skillnaden mellan övergående och stabil transfektion?
Övergående mot stabil transfektion | |
| Utländsk DNA integreras inte i ett värdgenom. | Utländsk DNA integreras med värdgenomet och blir en del av det. |
| Replikation inom värden | |
| Transiently transfekterade gener replikerar inte inom värden. Därför går gener inte till nästa generation. | Gener replikeras inom värden och vidarebefordras till kommande generationer. |
| Tidsperioden för genuttrycket | |
| Gener uttrycks för en ändlig tidsperiod och därefter förstörs de. | Gener blir en del av genomet och uttrycks inom generationen under en lång period. |
| Använda sig av | |
| Detta är användbart för att studera effekterna av kortvarigt uttryck av gener eller genprodukter. | Detta är användbart för att studera effekterna av genuttryck på lång sikt. |
| Detektion av transfektionen | |
| Gener uttrycks och kan lätt detekteras genom att införa en reportergen. | Stabil transfektion kan lätt upptäckas genom att infoga en valbar markör och välja genom artificiellt urval på media. |
| Förekomst och Process | |
| Övergående transfektion är vanlig och inte komplex att utföra. | Stabil transfektion är sällsynt i förekomst och komplex att utföra. |
| DNA-typ | |
| Mycket supercoiled DNA är lämpligt för transient transfektion. | Linjärt DNA är lämpligt för stabil transfektion. |
| tillämpningar | |
| Detta används för studier av genknockdown eller silencing med hämmande RNA, proteinproduktion i liten skala | Detta används för proteinproduktion på storskaliga, långsiktiga farmakologiska studier, genterapi, forskning om mekanismerna för långsiktig genetisk reglering |
Sammanfattning - Övergående mot stabil transfektion
Transienta och stabila transfektioner är två typer av transfektioner som visas under genen som överföres till eukaryota celler av icke-virusbaserade system. Transformerat främmande DNA är inte integrerat med värdgenomet vid övergående transfektion medan den integreras med värdgenomet vid stabil transfektion. Cirkulärt spolat DNA visas transient transfektion medan linjärt DNA föredrar stabil transfektion. Detta är skillnaden mellan transient och stabil transfektion. Men transient transfektion är vanligare och lätt jämfört med stabil transfektion. Men valet av en bland två beror på syftet med genöverföringen och varaktigheten av forskningsprojektet.
referenser:
1. Condreay, J. Patrick, Sam M. Witherspoon, William C. Clay och Thomas A. Kost. "Övergående och stabilt genuttryck i däggdjursceller transducerade med en rekombinant baculovirusvektor." Förhandlingar vid National Academy of Sciences i USA. National Academy of Sciences, 05 jan 1999. Web. 25 mars 2017
2. Kim, Tae Kyung och James H. Eberwine. "Mammalcellstransfektion: nutiden och framtiden." Analytisk och bioanalytisk kemi. Springer-Verlag, Aug. 2010. Web. 25 mars 2017
