Skillnad mellan Phusion och Taq Polymeras
Share
Huvudskillnad - Phusion vs Taq polymeras
DNA-polymeraser är ofta använda enzymer i molekylärbiologitekniker och är också naturligt närvarande i alla organismer som genomgår DNA-replikation. De är de viktigaste polymeriserande enzymerna som involverar under replikation. DNA-polymeras kan tillsätta nukleotider till den fria 3'-änden av DNA-strängen och därigenom orsaka förlängningen av en ny sträng. För närvarande är det på grund av utvecklingen av molekylärbiologi vid sjukdomsdiagnostik och industriella tillämpningar viktigt att tillverka polymeraser med olika fördelaktiga egenskaper. Detta ökar metodens noggrannhet och gör det till en snabbare teknik. Phusion- och Taq-polymeras är två kommersiellt producerade termostabila polymerasenzymer som används i speciella molekylära tillämpningar. Phusion är ett DNA-polymeras isolerat från Pyrococcus furiosus och används huvudsakligen i kloningsexperiment för att öka trovärdigheten. Taq DNA-polymeras är standard-DNA-polymeraset som används i polymerasekedjereaktionen (PCR) och det isoleras från den termostabila bakterien; Thermus aquaticus. De nyckelskillnad mellan de två enzymerna är källmikroorganismen. Phusion isoleras från extremofilen, Pyrococcus furiosus medan Taq-polymeras isoleras från termofilen, Thermus aquaticus.
INNEHÅLL
1. Översikt och nyckelskillnad
2. Vad är Phusion
3. Vad är Taq Polymerase
4. Likheter mellan Phusion och Taq Polymeras
5. Side vid sida-jämförelse - Phusion vs Taq Polymerase i tabellform
6. Sammanfattning
Vad är Phusion?
Phusion DNA-polymeras är ett nytt polymeras som tillverkas genom att isolera enzymet från Pyrococcus furiosus, vilket är en extremofil Archaea. Dessa mikrober ligger i extremt höga temperaturförhållanden, varigenom polymeraset är ett mycket värmestabilt polymeras. Fusionspolymeras används för att erhålla extremt trovärdighet över det konventionella termostabila polymeraset; Taq-polymeras. Fusionspolymeras kan amplifiera långa mallar upp till 7,5 kb genomiskt DNA. Den optimala polymerisationsförmågan hos Phusion-polymeras är vid 720 C. Fusion används också vid kloning av produkter för sekvensering, expressionsanalys och mutationsanalys.
Phusions DNA-polymeras har 3'-5'-exonukleasaktiviteten. Detta möjliggör korrekturläsning av den nyssyntetiserade strängen efter syntesen. Därför kan nukleotidmatchningarna lätt repareras. Således har den en mindre felfrekvens. Övergripande fördelar med Phusion-polymeras är;
- Extreme Fidelity
- Hög hastighet och minskad förlängningstid
- Robusta reaktioner och kräver minimal optimering
- Högt utbyte
Figur 01: Fusion
Den huvudsakliga nackdelen med Fusionspolymeras är att den inhiberas i närvaro av deoxyuridintrifosfat (dUTP). När dUTP ackumuleras i reaktionsblandningen kan det hämma verkningarna av Phusion-polymeras. Detta förhindras genom att behandla reaktionsblandningen med dUTPas före tillsats av enzymet. För närvarande används en dUTP-resistent variant av Phusion-polymeras känd som Pfu Turbo istället för Phusion-polymeras som ett botemedel mot detta problem.
Vad är Taq Polymerase?
Taq DNA-polymeras Uppfinningen har revolutionerat området för molekylärbiologi. Det löste ett stort problem i DNA-amplifiering. Taq-DNA-polymeras är ett värmestabilt polymerasenzym extraherat och isolerat från den termofila bakterien, Thermus aquaticus. Upptäckten av dessa enzymer leder till utvecklingen av PCR. Detta enzym har tillåtit användningen av polymeras-kedjereaktion vid DNA-amplifiering i stället för konventionella laborativa kloningstekniker. PCR används nu i molekylär diagnostik, jordbruks- och industriområden med många nya variationer som läggs till tekniken.
Figur 02: Taq-polymeras
Taq-DNA-polymeras fungerar vid det optimala temperaturintervallet mellan 720C - 800C. Taq-DNA-polymeras kräver en ko-faktor; magnesium för dess funktion. Taq-polymeras har inte 3'-5'-korrekturläsningsförmågan, därför är felhastigheten för Taq-DNA-polymeras hög i jämförelse med mer nyare typer av DNA-polymeraser, såsom Phusion-polymeras etc. Men populariteten för Taq-DNA-polymeras förblir den samma över hela världen av vetenskap på grund av bekvämligheten och flexibiliteten hos enzymet.
Vad är likheterna mellan Phusion och Taq-polymeras?
- Både Phusion- och Taq-polymerasenzymer är polymeriserande enzymer som kan tillsätta nukleotider till den 3'-fria änden av DNA-strängen.
- Både Phusion och Taq-polymeraser kräver en primersekvens för att initiera polymerisationen.
- Både Phusion- och Taq-polymeraser är värmestabila.
- Både Phusion och Taq-polymeraser används i PCR-mekanismer för att amplifiera DNA.
- När polymeras tillsätts till reaktionsblandningen tillsätts båda Phusion och Taq-polymeraser sist för att säkerställa enzymets effektivitet.
- Både Phusion- och Taq-polymeraser syntetiseras kommersiellt för molekylärbiologiska experimentella ändamål.
- Både Phusion och Taq polymeraser kräver en kofaktor för att slutföra sin funktion.
Vad är skillnaden mellan Phusion och Taq Polymeras?
Phusion vs Taq Polymeras | |
| Phusion är ett DNA-polymeras isolerat från Pyrococcus furiosus och används huvudsakligen i kloningsexperiment för att öka trovärdigheten. | Taq DNA-polymeras är det vanliga DNA-polymeraset som används i polymerasekedjereaktionen (PCR) och det isoleras från den termostabila bakterien, Thermus aquaticus. |
| Källa Organism | |
| Phusion extraheras från extremofil arkea - Pyrococcus furiosus. | Dessa litterära verk sträcker sig från koloniseringsperioden till avkoloniseringsperioden. |
| Bevisläsningsförmåga | |
| 3 '- 5' bevisläsningsförmåga finns i Phusion. | 3 '- 5' bevisläsningsförmåga saknas i Taq-polymeras. |
| Trohet | |
| Högtrohet finns med Phusion. | Taq-polymeras visar låg trovärdighet. |
| Förstärkning | |
| Phusion kan förstärka långa DNA-fragment. | Taq-polymeras kan förstärka mycket kortare DNA-fragment. |
| DUTP-förgiftning | |
| Fusionsverkan hämmas av ackumuleringen udda. | Taq-polymeras inhiberas ej av dUPT. |
Sammanfattning - Phusion vs Taq polymeras
Phusion- och Taq-DNA-polymeras är två värmestabila polymeraser som används i PCR-tekniker. Phusion är ett polymeras isolerat från extremofilen, Pyrococcus furiosus medan Taq isoleras från de termostabila bakterierna Thermus aquaticus. Taq-DNA-polymerasfunnet leder till PCR-uppfinningen. Phusion har många fördelar jämfört med Taq som har gjort Phusion till ett bättre alternativ för att producera högfidelis DNA. Imidlertid används Taq-polymeras fortfarande som standardpolymerasenzym i PCR. Detta är skillnaden mellan Phusion och Taq polymeras.
Referens:
1.Biolabs, New England. "Taq DNA-polymeraser." New England Biolabs: Reagenser för Life Sciences Industry. Tillgänglig här
2. "Phusion DNA-polymeras". New England Biolabs. Tillgänglig här
Image Courtesy:
1.GAM illustrerad av Nivin Nasri'By NivinN - eget arbete, (CC BY-SA 4,0) via Commons Wikimedia
2.'Taq'By Adenosine - eget arbete, (CC BY-SA 3.0) via Commons Wikimedia
