Skillnad mellan kloning och subkloning

Huvudskillnad - Kloning vs Subkloning
 

Kloning och subkloning är molekylära biologiska förfaranden som skapar genetiskt identiska celler eller organismer som bär DNA eller gen som är av intresse. Kloning är en teknik som innefattar införande av den intresserade genen eller DNA i en vektor, replikation av den i en värdbakterie och produktion av celler eller organismer som är exakta kopior av den genetiska sminken. Subkloning är en teknik som innefattar införande av genen av intresse, som redan är införd i en vektor, till en sekundärvektor, replikation av den i en värdbakterie och produktion av genetiskt identiska kopior av celler eller organismer. Den viktigaste skillnaden mellan kloning och subkloning är det, Vid kloning fortsätter genen av intresse, när den en gång ligerats in i en vektor, kloningsprocessen, medan den redan klonade genen av intresse separeras från föräldervektorn och införs igen i en mottagarvektor och fortsätter processen.

INNEHÅLL
1. Översikt och nyckelskillnad
2. Vad är kloning
3. Vad är Subkloning
4. Jämförelse vid sida vid sida - Kloning vs subkloning
5. Sammanfattning

Vad är kloning?

Kloning är det förfarande som producerar genetiskt identiska organismer eller celler. I naturen sker kloning i medel för asexuell reproduktion. När det inte finns någon genetisk rekombination eller förändring, får dotterceller samma genetiska smink av föräldern. Prokaryotiska och eukaryota organismer skapar kloner genom binär fission, spirande, mitos, etc. I molekylärbiologi är kloning av gener eller specifika fragment av DNA en populär metod för att studera strukturen och funktionen hos den specifika DNA-sektionen.

Huvudsyftet med molekylär kloning är att göra miljontals kopior av genetiskt identiska celler eller organismer som bär DNA-fragmentet av intresse (huvudsakligen gener). Det skapar organismer med exakta genetiska kopior av en annan. Primärt klonas specifika gener i molekylära studier för att erhålla strukturell och funktionell information och för DNA-sekvensering. Även för produktion av specifika proteiner eller produkter i stor skala används kloning i stor utsträckning.

Kloningsproceduren

De grundläggande stegen av kloningsförfarandet är som följer.

1. Identifiering och isolering av genen av intresse. (Amplifiering av genen av intresse av PCR).
2. Restriktionsmältning av genet av intresse (restriktionsendonukleas skar genen).
3. Restriktionsmältning av vektor DNA. (Vector DNA skärs även med samma restriktionsendonukleas).
4. Infogning av genen i vektorn och bildning av den rekombinanta molekylen.
5. Transformation av den rekombinanta vektorn i en värdbakterie.
6. Isolering och identifiering av de transformerade bakterierna (plasmidvektorn bör innehålla en selekterbar gen, oftast en antibiotikaresistensgen för screen-transformerade bakterier).
7. Rekombinanta genexpression inom värden.

Figur_01: Kloningsprocedur

Vad är Subkloning?

Subkloning är ett förfarande för att flytta en gen av intresse från en vektor till en annan vektor för att se uttrycket av genen för att erhålla den önskade funktionaliteten hos genen. I denna metod är två vektorer inblandade; nämligen föräldervektor och destinationsvektor. Klonade insatser flyttas igen till en andra vektor i subkloning. Målet att överföra genen från den första vektorn till den andra vektorn är att erhålla något som inte kunde göras av den första vektorn eller att separera en gen igen inom det redan klonade fragmentet av DNA och uttrycka det ensamt. Restriktion enzymer används i detta förfarande i början.

Subkloningsprocedur

De grundläggande stegen i subkloning är som följer.

1. Med hjälp av restriktionsendonukleaser, separering av DNA av intresse i donatorplasmiden (föräldervektorn).
2. Amplifikation av DNA av intresse med användning av PCR.
3. Rening av PCR-produkten (DNA av intresse) genom gelelektrofores.
4. Öppning av mottagarplasmiden med samma restriktionsendonukleaser användes för att separera DNA av intresse i moderplasmiden.
5. Ligering av DNA av intresse (gen) i mottagarplasmiden för att skapa den subklonade plasmiden.
6. Transformation av den subklonade vektorn till en kompetent värdbakterie.
7. Screening av transformerade celler.
8. Rening av plasmid-DNA och användning för DNA-sekvensering eller expression av generna för att erhålla de önskade produkterna.

Subkloning utförs vid tillfällen att isolera en gen från den klonade gruppen av gener eller när genen av intresse krävs för att överföras till en användbar plasmid för att se den exakta funktionen av genen av intresse.

Figur_02: Subkloningsprocedur

Vad är skillnaden mellan kloning och subkloning?

Kloning vs subkloning
Kloning är det förfarande som producerar genetiskt identiska organismer eller celler.	Subkloning är ett förfarande för att flytta en gen av intresse från en vektor till en annan vektor för att se uttrycket av genen för att erhålla den önskade funktionaliteten hos genen.
Bearbeta
Separera DNA av intresse från organismen och infogas i en vektor en gång och klonad	Redan klonat DNA separeras från den första vektorn och införs i en andra vektor och klonas.
Infoga rörelse via vektorer
Flytta inte insatser (DNA av intresse) från en vektor till en annan vektor.	Flytta insatser från föräldervektor till destinationsvektor.

Sammanfattning - Kloning vs Subkloning

Kloning skapar genetiskt identiska celler eller organismer med den infogade genen eller DNA av intresse. Det fortskrider genom separation och införande av DNA av intresse i en vektor och expression inom en värdbakterie. Subkloning delar liknande steg med kloning. I subkloning införs emellertid redan klonat DNA-fragment (gen av intresse) i en vektor och transformeras till en värdbakterie. Det är den viktigaste skillnaden mellan kloning och subkloning.

referenser

1. Lodish, Harvey. "DNA-kloning med plasmidvektorer." Molecular Cell Biology. 4: e upplagan. U.S. National Library of Medicine, 01 jan 1970. Web. 05 mars 2017
2. ”Subkloning.” Wikipedia. Wikimedia Foundation, 14 februari 2017. Web. 06 mars 2017
3. "Subkloning." Subkloning | Open Access-artiklar | Open Access-tidskrifter | Konferenshandlingar | Redaktörer | Författare | Granskare | vetenskapliga händelser. N.p., n.d. Webb. 06 mars 2017
4. Wackerhage, Henning. "Hur man subklonar." Hur man subklonerar. N.p., 01 Jan. 1970. Web. 06 mars 2017

Image Courtesy

1. Molecular Cloning Procedure - Genom CNX OpenStax [CC BY 4.0], via Wikimedia Commons
2. Subkloningsprocedur - Genom den ursprungliga uppladdaren var Takometer på English Wikipedia (Överförd från en.wikipedia till Commons.) [CC BY 2.5], via Wikimedia Commons