Skillnad mellan stapelgel och separerande gel

Huvudskillnad - stapelgel mot separering Gel
 

Termerna staplande gel och separeringsgel används för att förklara SDS-PAGE tekniken. SDS-PAGE eller natriumdodecylsulfat-polyakrylamidgelelektrofores är en laboratorieteknik som används för att separera proteinmolekyler baserat på deras molekylvikter. Teorin bakom tekniken är att proteiner med olika molekylvikter visar olika migrationshastigheter. molekyler med låg molekylvikt migrera snabbare medan molekyler med hög molekylvikt migrera långsamt. Mediet för migration är en gel. Det finns två typer av geler benämnda stapelgel och separeringsgel. De nyckelskillnad mellan stapelgel och separeringsgel är det pH-värdet på stapelgelén är 6,8 medan pH-värdet för separeringsgelén är 8,8.

INNEHÅLL

1. Översikt och nyckelskillnad
2. Vad är Stacking Gel
3. Vad är separerande gel
4. Förhållande mellan stapelgel och separerande gel
5. Sida vid sida-jämförelse - stapelgel vs separerande gel i tabellform
6. Sammanfattning

Vad är Stacking Gel?

Stapelgel är en lågkoncentrerad polyakrylamidgel som placeras på toppen av mer koncentrerad upplösande gel (separeringsgel) i SDS-PAGE-teknik. Staplingsgelén används för att förbättra upplösningen av elektrofores. Upplösningen ökar på grund av skillnaden mellan koncentrationer av stapelgel och upplösning av gel som påverkar proteinerna i provet. Eftersom koncentrationen av polyakrylamid i stapelgel är låg, är porstorleken högre. Detta bidrar också till att öka separationen.

Stapelgelén är en lös polyakrylamidgel med stora porer på ca 7% polyakrylamid. Dessa porer verkar inte som ett betydande hinder för stora proteinmolekyler. Därför påverkar denna gel något på rörligheten för dessa proteiner. Detta gör separation beroende på rörligheten och storleken av protein genom att koncentrera dem mellan två geler.

Figur 01: SDS-PAGE-akrylamidgel

Stabiliseringsgelens pH är 6,8. Dess pH är surt än det för att lösa gel med 2 pH-enheter. Detta pH innebär en lägre jonstyrka följaktligen en högre elektrisk resistans. Detta provar rörligheten av proteiner än andra laddade partiklar närvarande i gelén.

Vad är separerande gel?

Separering av gel eller upplösningsgel av en SDS-PAGEtechnique är en högkoncentrerad polyakrylamidgel som placeras på toppen av lågkoncentrerad stapelgel. Separeringsgelén innehåller en hög mängd polyakrylamid (10%). PH hos denna gel hålls som pH = 8,8, vilket är en högre pH-nivå än den hos staplingsgelén.

Figur 02: En gelelektroforesapparat

När proteinmolekylerna når separeringsgelén, sänks migreringen av dessa molekyler eftersom separeringsgelén är en högkoncentrationsgel med en liten porstorlek som kan verka som en avsevärd barriär för proteinmolekylernas rörelse. Denna långsamma möjliggör att de andra proteinerna migrerar långsamt för att komma ikapp, vilket resulterar i ett smalt koncentrerat band mellan de två gelerna.

Vad är förhållandet mellan stapelgel och separerande gel?

• Både stapelgel och separerande geltyper används i samma apparat.

Vad är skillnaden mellan stapelgel och separerande gel?

Stacking Gel vs Separating Gel
Stapelgel är en lågkoncentrerad polyakrylamidgel som placeras på toppen av mer koncentrerad upplösande gel (separeringsgel) i SDS-PAGE-teknik.	Separering av gel eller upplösningsgel av en SDS-PAGE-teknik är en högkoncentrerad polyakrylamidgel som placeras på toppen av en lågkoncentrerad stapelgel.
Placering
Stapelgel placeras på den upplösande (separerande) gelén.	Separationsgel placeras på botten av behållaren som används för gelelektrofores.
Koncentration
Koncentrationen av stapelgel är hög.	Koncentrationen av separerande gel är låg.
Polyakrylamidinnehåll
Stapelgel innehåller ca 7% polyakrylamid.	Separationsgel innehåller ca 10% polyakrylamid.
pH
Stabiliseringsgelens pH är 6,8.	PH-värdet hos separeringsgelén är 8,8.
Porstorlek
Stora porstorlekar finns i stapelgel.	Små porstorlekar finns närvarande i separeringsgel.
Upplösning
Stapelgel ger bättre upplösning.	Separering av gel ger en dålig upplösning.

Sammanfattning - Stacking Gel vs Separating Gel

Stapelgel och separeringsgel är två typer av polyakrylamidgeler som används för att få bättre separation av proteinmolekyler i ett givet prov. Skillnaden mellan stapelgel och separeringsgel är att pH hos stapelgelen är 6,8 medan pH-värdet hos separerande gelén är 8,8.

Referens:

1. "Polyakrylamidgelelektrofores". Polyakrylamidgelelektrofores (teori): Molekylärbiologi Virtual Lab II: Bioteknik och biomedicinsk teknik: Amrita Vishwa Vidyapeetham Virtual Lab. Tillgänglig här  
2. "Hur SDS-PAGE Works." Bitesize Bio, 16 Feb. 2018. Tillgänglig här
3. "SDS-PAGE stapelgel - BICH 608 (Polymenis-Pettigrew)." Google Sites. Tillgänglig här 

Image Courtesy:

1.SDS-PAGE Acrylamide gel'By konton på engelska Wikipedia, (CC BY 3.0) via Commons Wikimedia  
2.'Gel elektroforesapparat 'Av Jeffrey M. Vinocur - Egent arbete,  (CC-BY 2,5) via Commons Wikimedia